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時(shí)間：2019年03月29日 分類：科學(xué)技術(shù)論文 次數(shù)：254
摘要:論述了毛細(xì)管電泳法的優(yōu)點(diǎn)及在分離等眾多領(lǐng)域的應(yīng)用前景。闡述了毛細(xì)管電泳技術(shù)的分離模式、分離原理、聯(lián)用技術(shù)及涂層技術(shù)。著重介紹了毛細(xì)管電泳介孔材料涂層技術(shù)的原理及應(yīng)用，如涂層技術(shù)在毛細(xì)管電泳法分析過(guò)程中的研究及發(fā)展，在藥物拆分、環(huán)境監(jiān)測(cè)、臨床檢測(cè)等領(lǐng)域應(yīng)用等。
關(guān)鍵詞:毛細(xì)管電泳法,涂層技術(shù),介孔材料,應(yīng)用
毛細(xì)管電泳法是現(xiàn)今熱門(mén)的色譜分析技術(shù)之一，由于具有進(jìn)樣少、無(wú)污染、分離效果好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，得到各領(lǐng)域?qū)＜业膹V泛關(guān)注，毛細(xì)管電泳技術(shù)也因此得到快速發(fā)展。按照分離模式、分離原理、聯(lián)用技術(shù)及涂層技術(shù)的不同，可將毛細(xì)管電泳法進(jìn)行不同的分類[1]。這些技術(shù)的進(jìn)步大大促進(jìn)了毛細(xì)管電泳技術(shù)發(fā)展及應(yīng)用。
與此密切相關(guān)的涂層技術(shù)更是得到快速發(fā)展，尤其是介孔材料涂層技術(shù)的研究，在手性藥物的拆分等領(lǐng)域取得令人驚喜的成績(jī)。與此同時(shí)，毛細(xì)管電泳技術(shù)的分離及拆分機(jī)理也得到發(fā)展，讓毛細(xì)管電泳技術(shù)更加有理有據(jù)，進(jìn)而促進(jìn)毛細(xì)管電泳法的快速發(fā)展。同時(shí)，也拓寬了介孔材料的應(yīng)用范圍。介孔材料的粒子孔徑在2nm～50nm之間，由于孔徑小、分散度高、比表面積大等優(yōu)點(diǎn)，可以很好地吸附在毛細(xì)管內(nèi)壁，改善毛細(xì)管的結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)毛細(xì)管電泳技術(shù)對(duì)多種物質(zhì)的分離。由于毛細(xì)管電泳涂層技術(shù)的發(fā)展進(jìn)一步帶動(dòng)其在各領(lǐng)域的應(yīng)用。
目前，毛細(xì)管電泳技術(shù)比較熱門(mén)的應(yīng)用領(lǐng)域主要有食品營(yíng)養(yǎng)與安全、臨床樣本檢測(cè)、藥物分析、生命科學(xué)研究、環(huán)境監(jiān)測(cè)等。隨著毛細(xì)管電泳技術(shù)的發(fā)展與機(jī)理的深入研究，相信毛細(xì)管電泳法會(huì)有更寬廣的發(fā)展及應(yīng)用前景。
1毛細(xì)管電泳法的分離原理
毛細(xì)管電泳法儀器的分離通道是毛細(xì)管柱，一般以石英或玻璃為原材料制成。因內(nèi)壁的表面易形成硅羥基及硅氧負(fù)離子，在電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的推動(dòng)下，依據(jù)樣品中各組分的淌度(單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的遷移速度)或分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)各組分分離[1]。
與一般色譜技術(shù)的主要區(qū)別在于其分離原理不是基于組分在流動(dòng)相和固定相中分配系數(shù)不同，而是在電場(chǎng)作用下離子遷移速度的不同[1-2]。毛細(xì)管電泳儀的主要部件有直流高壓電源、毛細(xì)管、電極和電極槽、沖洗進(jìn)樣系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等。
2毛細(xì)管電泳法的分離模式
目前，以毛細(xì)管電泳法為載體的分離分析方法有毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)、毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MECC，MEKC)、毛細(xì)管等電聚焦(CIEE)、毛細(xì)管等速電泳(CITP)、毛細(xì)管電滲色譜(CEC)、非水毛細(xì)管電泳(NACE)、親和毛細(xì)管電泳(ACE)、毛細(xì)管陣列電泳(CAE)、芯片式毛細(xì)管電泳(ChipCE)等[1]。采用不同的分離模式可以分離不同性質(zhì)及不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，這為毛細(xì)管電泳法的靈活應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
3毛細(xì)管電泳法的聯(lián)用技術(shù)
樣品試驗(yàn)前須進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理一般包括兩個(gè)過(guò)程:樣品的提取及待測(cè)液的配置。樣品提取是通過(guò)分離萃取將樣品的水溶性物質(zhì)及水溶性物質(zhì)分離，以待備用。樣品待測(cè)液的配置主要是將提取液按檢測(cè)器要求，配置成待測(cè)樣品溶液，以供儀器分析與檢測(cè)。樣品中有效成分的測(cè)定即樣品分析技術(shù)，在儀器分析中，需分三個(gè)步驟:一是分離，二是檢測(cè)，三是鑒定。分離方法常見(jiàn)的主要是色譜法，包括氣相色譜法及液相色譜法。
另外，還有近三十年發(fā)展起來(lái)的毛細(xì)管電泳法等。而檢測(cè)及鑒定儀器，從原理上看，主要包括光學(xué)及電學(xué)檢測(cè)儀器。常用的光學(xué)儀器有質(zhì)譜(一般質(zhì)譜、時(shí)間飛行質(zhì)譜)、光譜(紅外光譜、紫外、熒光)、核磁共振。電學(xué)儀器主要有毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測(cè)法(CEED)、毛細(xì)管電泳高頻電導(dǎo)法(CE-HFCD)等電化學(xué)(EC)檢測(cè)器。若想在一次試驗(yàn)中就實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的分離、檢測(cè)及鑒定，則需將分離儀器與檢驗(yàn)儀器聯(lián)起來(lái)用。
這樣就產(chǎn)生了一系列聯(lián)用的原理及連用技術(shù)，進(jìn)而促進(jìn)了一批聯(lián)用儀器的發(fā)展。目前，最常用的則是氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC/MS)、液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC/MS)、毛細(xì)管電泳和質(zhì)譜聯(lián)用儀(CE/MS)以及核磁共振(NMR)等[2]。合適的分析方法，可以提高儀器和技術(shù)的檢測(cè)速度、選擇性和靈敏度，最終，可以確定檢測(cè)樣品的最優(yōu)實(shí)驗(yàn)方法。
毛細(xì)管電泳技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的新型物理分析分離技術(shù)，具有高效、穩(wěn)定、高靈敏的優(yōu)點(diǎn)，可以對(duì)超微量樣品進(jìn)行定性定量分析。在天然產(chǎn)物化學(xué)分析、藥品含量檢測(cè)、食品工業(yè)監(jiān)測(cè)等研究方面有著廣泛的應(yīng)用前景，在廣大的分析分離領(lǐng)域中都具有巨大的發(fā)展?jié)摿ΑE與各種檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用，隨著檢測(cè)器的發(fā)展，毛細(xì)管電泳法的靈敏度會(huì)得到提高。這種技術(shù)有利于毛細(xì)管電泳法的自動(dòng)化操作，為毛細(xì)管電泳技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用提供更多的可能。
4毛細(xì)管電泳法的涂層技術(shù)
毛細(xì)管電泳分離儀器分離樣品的容器為毛細(xì)管柱。通常，毛細(xì)管柱由石英玻璃制成，這種毛細(xì)管柱在分離帶電粒子，特別是陽(yáng)離子效果非常好。但在分離陰離子尤其是蛋白質(zhì)等生物大分子應(yīng)用方面遇到了瓶頸。由于石英毛細(xì)管柱的內(nèi)壁有一層硅氧基，易吸附氫離子等陽(yáng)離子形成雙電層，在電場(chǎng)作用下使整個(gè)溶液向負(fù)極移動(dòng)，一般按陽(yáng)離子、中性粒子、陰離子的順序先后移向負(fù)極。由于毛細(xì)管壁對(duì)離子的吸附，致使毛細(xì)管電泳法在中性粒子、生物大分子、手性粒子分離等領(lǐng)域的應(yīng)用中受到了限制。為控制CE電滲流或防止電泳中的蛋白質(zhì)吸附等問(wèn)題，研究者們進(jìn)行了深入的探索，并發(fā)現(xiàn)了一些解決辦法，其中，用的是毛細(xì)管柱涂層法。
伴隨著分析對(duì)象的日益廣泛和分析要求的不斷提高，涂層毛細(xì)管柱的重要性愈加突出，其類型也呈現(xiàn)出多樣化的特點(diǎn)。根據(jù)其作用特點(diǎn)，涂層毛細(xì)管柱可大致分為非手性涂層柱和手性涂層柱。根據(jù)涂層材料的不同，可將涂層柱分為:納米粒子[3]、聚合物[4]、離子液體[5-8]、有機(jī)金屬骨架[9-10]、生物大分子[10]、功能性試劑涂層[11]及其他物質(zhì)[12-13]等。
這些涂層材料在用毛細(xì)管電泳儀分離、檢測(cè)及鑒定技術(shù)中起到突破瓶頸的核心作用。介孔涂層材料的比表面積大、吸附性能好。特別適合用作毛細(xì)管壁涂層材料，改善毛細(xì)管壁的吸附性。根據(jù)樣品的性質(zhì)，結(jié)合涂層材料的特點(diǎn)，新型毛細(xì)管涂層柱用于不同的領(lǐng)域，已然成為毛細(xì)管涂層柱的研究一個(gè)熱門(mén)方向。
5涂層毛細(xì)管電泳技術(shù)應(yīng)用
涂層毛細(xì)管電泳技術(shù)的發(fā)展，特別是介孔涂層材料與毛細(xì)管柱的結(jié)合，有效地改善了毛細(xì)管壁對(duì)被分析物的吸附。因此，涂層后的毛細(xì)管電泳分離技術(shù)滲透到很多應(yīng)用領(lǐng)域。如:中藥成分的檢測(cè)與分離分析，氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)等生物大分子的分離與測(cè)定，食品營(yíng)養(yǎng)成分、添加劑、微生物含量等的檢測(cè)，手性藥物對(duì)映體的分離與分析及水樣中污染物的檢測(cè)等，并都取得了顯著的分離與檢測(cè)效果，促進(jìn)了這些領(lǐng)域的發(fā)展。
5.1中藥成分的檢測(cè)與分析
每種中藥材多含有黃酮類、生物堿類、苷類等有效成分，但中藥中這些成分多且含量少，一般的分離分析方法很難實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥成分的有效分離及測(cè)定。毛細(xì)管電泳法因具有多種優(yōu)勢(shì)，在此領(lǐng)域應(yīng)用中，取得非常好的成績(jī)，建立了分離中草藥的新方法。中藥有很多種類，而且不同種類的中藥有效成分不同。相同種類的中藥生長(zhǎng)在不同的地區(qū)主要成分及含量也不同。再加上中藥成分非常多，因此中藥的檢測(cè)很困難。毛細(xì)管電泳法在這方面的發(fā)展前景很大，如于虹敏等[14]利用毛細(xì)管電泳技術(shù)檢測(cè)了抑肽酶及其增加的中藥成分。
毛細(xì)管電泳法測(cè)定人參皂苷的含量[15-16]、CE法測(cè)定草藥三七中三七素的含量[17]、何首烏中藥中各種有效成分的分析與檢測(cè)[18]等。陳琴華等[19]采用不同的毛細(xì)管電泳分離模式(MEKC、CZE、CEC等)對(duì)中藥中黃酮類物質(zhì)實(shí)現(xiàn)了分離及檢測(cè)。南葶藶子與車前子相似，可以用高效毛細(xì)管電泳法實(shí)現(xiàn)二者的鑒別與分離[20]。
5.2氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)等生物大分子的分離與測(cè)定
生物大分子一般結(jié)構(gòu)多種多樣，相對(duì)分子質(zhì)量高的特點(diǎn)，易與檢測(cè)儀器相互作用，影響檢查效果。因此在鑒別與分析時(shí)比較困難。由于毛細(xì)管電泳法與涂層技術(shù)的結(jié)合，可以控制和改變蛋白質(zhì)在毛細(xì)管中的速度和遷移方向，因此，在分離分析多肽、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的分離效果比其它方法好很多，而且成本低、操作快速簡(jiǎn)單。蛋白質(zhì)等生物大分子的分離很困難，因?yàn)槠浞€(wěn)定性差、對(duì)外界條件非常敏感，易變性失活。
常用的分離技術(shù)都存在各種各樣的不足。因此，毛細(xì)管電泳法在分離及檢測(cè)蛋白質(zhì)[21]等生物大分子方面顯示較大的優(yōu)勢(shì)。如Ma[21]等研究出可用于日常檢測(cè)的分析利妥昔單抗的毛細(xì)管電泳法。Zakaria等[22]利用毛細(xì)管電泳涂層技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸三種氨基酸的分離。Schulze等[23]利用毛細(xì)管電泳法快速地分離了氨基酸衍生物及天然蛋白質(zhì)。宋瓏等[24]利用毛細(xì)管電泳技術(shù)檢測(cè)到尿液中的尿液蛋白并將其提取出來(lái)。丁曉靜等[25]利用毛細(xì)管電泳法建立了分析α-乳白蛋白、β-乳球蛋白A及β-乳球蛋白B的方法。可預(yù)見(jiàn)，毛細(xì)管電泳法在這一領(lǐng)域?qū)⒂懈钊氲陌l(fā)展和應(yīng)用。
5.3食品營(yíng)養(yǎng)成分、添加劑、藥物殘留等含量的檢測(cè)
食品中的營(yíng)養(yǎng)成分及其他成分多種多樣。有些商家為牟取暴利，會(huì)在食品種植、生產(chǎn)、加工過(guò)程中使用違禁藥品或過(guò)量使用藥品及添加劑。為保障食品的安全，必須采用簡(jiǎn)單有效的檢測(cè)方法。食品的組成復(fù)雜多變，許多營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和有害物質(zhì)的檢測(cè)給傳統(tǒng)的檢測(cè)方法帶來(lái)了很大的挑戰(zhàn)。由于涂層材料的種類很多，介孔涂層材料對(duì)不同物質(zhì)的吸附性可通過(guò)改變材料的微觀結(jié)構(gòu)來(lái)控制，且毛細(xì)管電泳法(CE)具有多種分析模式和檢測(cè)方法，可以滿足對(duì)食品檢測(cè)的要求。
因此研究者們開(kāi)始試著將毛細(xì)管電泳技術(shù)應(yīng)用在食品檢測(cè)從而取得了較好的結(jié)果，為食品檢測(cè)開(kāi)辟了一條新的途徑。食用油的各種營(yíng)養(yǎng)及添加成分就可以用區(qū)帶毛細(xì)管電泳(CZE)法來(lái)檢測(cè)[26]。非法添加非食品添加劑或過(guò)量添加食品添加劑都會(huì)危害使用者的健康。如蘇丹紅[27-28]、瘦肉精[29-30]、孔雀石綠[31]、三聚氰胺[32]和皮革水解物[33]等化合物引起的食品質(zhì)量問(wèn)題。食品中的藥物殘留也可以用毛細(xì)管電泳法監(jiān)控。另外毛細(xì)管電泳法還可以檢測(cè)食品中重金屬離子[34]、細(xì)菌等微生物的含量[35]。
5.4水樣中污染物的檢測(cè)
隨著工業(yè)的迅速崛起，環(huán)境污染問(wèn)題也伴隨而來(lái)，引起人們的特別關(guān)注。由于受污染的水中含有各種化合物，用于檢測(cè)分析的方法有很多。但在檢測(cè)速度、靈敏度、樣品處理等方面有很多不足之處。毛細(xì)管電泳(CE)檢測(cè)技術(shù)及介孔涂層材料的吸附性能恰好可以彌補(bǔ)這些不足。徐銀娣等[36]利用HPCE同時(shí)分離水樣和印染廢水中的3，5-二硝基苯甲酸、對(duì)硝基苯甲酸、對(duì)硝基苯酚等硝基苯化合物，并確定了最優(yōu)條件。結(jié)果快速準(zhǔn)確，可用于實(shí)際印染廢水中的硝基苯類化合物的分離測(cè)定。彭振磊等[37]利用毛細(xì)管電泳法3min內(nèi)就對(duì)檸檬酸完成了分析，且分離效果很好。
6展望
毛細(xì)管電泳法至上個(gè)世紀(jì)八十年代以來(lái)，發(fā)展迅速，分離優(yōu)勢(shì)很多。首先，具有樣品處理及操作簡(jiǎn)單、進(jìn)樣量少、分離效率高、環(huán)保、成本低等優(yōu)點(diǎn)。其次，分離模式多，可以與多種檢測(cè)器聯(lián)用。因此可根據(jù)不同的分離要求靈活地分離檢測(cè)不同的物質(zhì)。另外，由于涂層技術(shù)的引入，特別是介孔材料的應(yīng)用，顯著改善了毛細(xì)管壁的吸附缺陷，使毛細(xì)管電泳技術(shù)的發(fā)展得到極大推動(dòng)力[38]。目前，廣泛地應(yīng)用在藥物檢測(cè)及分離，氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)等生物大分子的分離與測(cè)定，食品檢測(cè)及水樣中污染物的檢測(cè)等領(lǐng)域[39]。
作為發(fā)展時(shí)間不長(zhǎng)的新型分離技術(shù)，毛細(xì)管電泳法仍存在很多問(wèn)題。如重現(xiàn)性有待進(jìn)一步提高、穩(wěn)定性還需改進(jìn)、檢測(cè)范圍有限等。而且與其他檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用方面及涂層材料的穩(wěn)定性等方面還存在許多技術(shù)問(wèn)題。但這些恰恰說(shuō)明毛細(xì)管電泳法的發(fā)展空間很大。解決這些問(wèn)題也將成為毛細(xì)管電泳法的熱門(mén)方向，為毛細(xì)管電泳的發(fā)展及應(yīng)用指明了新的道路，為分離及檢測(cè)技術(shù)注入新的研究動(dòng)力。
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