摘要:隨著老齡化社會的到來，骨質疏松癥(osteoporosis，OP)已成為全球范圍內嚴重危害人們健康的常見慢性疾病之一。中醫(yī)藥是我國獨特的醫(yī)療衛(wèi)生資源，在骨質疏松癥防治方面具有一定的優(yōu)勢。動物模型是醫(yī)學實驗研究過程中的重要載體，采用病證結合動物模型研究疾病已成為中醫(yī)藥研究的重要內容，是中醫(yī)藥現代化研究中不可或缺的部分。本文旨在對目前常用的骨質疏松癥動物模型和病證結合動物模型的構建及評價方法進行總結，以期為從事骨質疏松癥實驗研究的科研工作者提供參考。

　　關鍵詞:骨質疏松癥;病證結合;動物模型;造模方法

　　西醫(yī)辨病和中醫(yī)辨證相結合的現代病證結合模式，是當前中醫(yī)藥及中西醫(yī)結合工作者開展臨床與科研實踐的重要模式之一[1]。動物模型是醫(yī)學實驗研究過程中的重要載體，以中醫(yī)基礎理論和病證結合理論為指導，構建出既符合西醫(yī)疾病特征又具備中醫(yī)證候特點的規(guī)范化病證結合動物模型，是開展中醫(yī)藥現代化研究的重要內容之一[2-3]。

　　骨質疏松癥(osteoporosis，OP)是一種全身骨骼代謝性疾病，已成為全球范圍內嚴重危害人們健康的常見慢性疾病之一[4-6]。在我國，有學者研究表明以-2SD為診斷標準預測40歲以上人群OP發(fā)病率為19.74%，約有1.12億患病人群[7]。OP覆蓋人群廣泛且嚴重影響人們的生活質量，所需的醫(yī)療費用給社會造成了極大的經濟負擔。

　　中醫(yī)藥是我國獨特的醫(yī)療衛(wèi)生資源，在OP防治方面具有一定的優(yōu)勢。近年來，兼具西醫(yī)疾病特點和中醫(yī)證候特征的OP病證結合動物模型相繼構建成功，并應用于中醫(yī)藥干預OP等多方面的研究，為揭示中醫(yī)藥療效及深入了解OP相關機制奠定了一定的基礎。本文旨在對目前常用的OP動物模型和病證結合動物模型的構建及評價方法進行總結，以期為OP的實驗研究提供參考。

　　1骨質疏松癥動物模型

　　OP發(fā)病機制十分復雜，骨代謝疾病一直是骨科等相關領域研究的熱點。經過長期的實踐探索，OP動物模型構建類型紛繁多樣，如:手術誘導型[8-13](去勢摘除雙側卵巢/睪丸[8])、藥物誘導型[14-18](腎上腺皮質激素等藥物[14-15])、失用誘導型[19-20]、飲食誘導型[21-22](低鈣飲食[22])、基因敲除型[23-24](RANKL等基因[23])、自然退變型[25-26]等。

　　造模動物的選擇也具有多樣性，常用的有SD或Wistar大鼠、小鼠，兔、羊、豬、犬和獼猴等動物較少應用。造模的時間一般集中在2個月左右。OP模型因研究內容不同而各具特點，如谷氨酸單鈉藥物誘導的模型適用于腦源性骨質疏松研究[16]，SAMP6小鼠更適用于老年性OP研究[25-26]。

　　但不論如何，理想的OP模型至少需要符合以下兩點:一是簡便，構建模型的方法簡單，可控性和可操作性強，造模周期較短，能較好的模擬OP發(fā)生和發(fā)展的過程;二是驗廉，動物模型應與人體條件具有一致性，能最大程度反映人體的機能狀態(tài)，且模型驗證具有較強的可重復性，造模費用適中等。伴隨OP模型的構建成功，其評價標準也不斷發(fā)展完善，主要包括骨密度測定、病理學骨組織形態(tài)觀察、生化指標檢測分析、骨生物力學指標測試等，多手段綜合評估方法在OP動物模型評價方面凸顯出關鍵作用。

　　2骨質疏松癥病證結合模型構建

　　中醫(yī)古籍中雖沒有“骨質疏松癥”的病名，但根據其病因病機及臨床表現，可將本病歸為“骨枯”、“骨痹”、“骨痿”等范疇。OP的發(fā)生發(fā)展是多臟腑共同作用導致的，其中腎虧為主要病因，肝虛乃關鍵因素，脾虛是重要病因[32]。腎主骨而生髓，為全身各臟陰陽之根本，若腎精虧乏則骨髓生化無源，全身結構功能受到影響，臟腑功能衰退而致骨痿，故腎虛精虧是主要病因;肝主身之筋膜，《證治準繩》中記載:“肝虛無以養(yǎng)筋，故機關不利。”

　　故肝血虛而不能濡養(yǎng)筋膜，肝氣衰則筋不能動，導致活動受限，故肝虛乃關鍵因素;脾乃后天之本，其在體合肉主四肢，脾胃虛弱則氣血生化不足，先天之精無以資養(yǎng)后天之精血，日久遂致髓少骨松，故脾虛是重要病因[33]。腎、肝、脾三臟相互聯系、相互影響，共同參與OP的生理病理全過程。

　　中醫(yī)藥在骨質疏松的防治方面療效確切，臨床上多采用補益肝腎、補脾益腎等治法厘定處方進行治療，笪巍偉等[34]研究表明通過補“先天”和養(yǎng)“后天”的方法及基于此理論指導下的健脾補腎方[35]均可以促進骨質疏松性模型小鼠骨折的愈合，其他的經典名方如左歸丸[36]、右歸丸[37]等方劑同樣作用明顯，但具體相關作用機制卻尚未明確[38]。

　　動物模型已經成為開展醫(yī)學相關研究的必備手段，盡管目前已經建立了諸多用于OP研究的動物模型，但根據傳統(tǒng)理論指導的具有中醫(yī)特色的病證結合研究模型甚少，成為制約中醫(yī)藥、中西醫(yī)結合醫(yī)學工作者開展OP研究的因素之一。目前，OP病證結合動物模型主要有三種:①腎陽虛證[39]:陳劍磨等[40]將去勢小鼠(摘除卵巢)骨質疏松模型與氫化可的松誘導的腎陽虛模型結合起來構建OP腎陽虛病證結合模型，并通過觀察造模小鼠的癥狀體征、檢測促腎上腺皮質激素等生化指標、骨密度檢測、骨形態(tài)組織病理觀察等方法對模型進行評價。

　　與對照組相比，病證結合模型組小鼠出現腎陽虛癥狀，且促腎上腺皮質激素、促甲狀腺激素的水平降低，股骨及腰椎的骨密度下降，病理學觀察骨小梁排列稀疏且較細，破骨細胞數目增多等。因此，其得出結論認為造模成功，且方法是穩(wěn)定可靠的。

　　②腎陰虛證:夏炳江等[41-42]在去勢小鼠OP模型的基礎上灌服甲狀腺片混懸液構建復合的腎陰虛模型，或者通過單獨臀肌注射地塞米松磷酸鈉構建OP腎陰虛模型，其表明這兩種造模方法均能夠使造模后小鼠具有腎陰虛和OP的癥狀和體征，與對照組相比，病證結合模型組體重增加緩慢，雌二醇水平降低，環(huán)磷酸腺昔/環(huán)磷酸鳥昔的比值升高，骨密度檢測也明顯發(fā)生改變，結果表明該模型是可行的，且其造模干擾因素較少，可操作性和可控性較強。

　　③脾腎兩虛證:劉梅潔等[43]通過去勢和中藥大黃灌胃兩種方法結合構建脾腎兩虛復合型OP模型，動態(tài)觀察大鼠的行為方式，并采用檢測大鼠骨量、骨吸收等指標對模型進行評估。結果表明脾腎兩虛模型組大鼠出現與臨床較吻合的脾虛證證候特征，與假手術組相比，其骨小梁體積百分比顯著降低，骨小梁吸收表面和形成表面百分比、骨小梁和骨皮質礦化率均顯著增高，該模型能較大程度的符合臨床的發(fā)病特點，具有可行性。

　　3存在的問題及展望

　　采用病證結合動物模型研究疾病發(fā)生機制與干預措施作用機制已成為中醫(yī)藥研究的重要內容，是中醫(yī)藥現代化研究中不可或缺的部分。OP病證結合動物模型在疾病造模的基礎上取得了一定的成績，但不可否認，其模型構建還存在一些問題與爭議，暴露出一系列亟待需要解決和引起重視的問題。第一是造模思路，目前OP病證結合模型的造模方法僅停留在疾病模型的基礎上加載中醫(yī)病因，從而模擬形成相應的中醫(yī)證候以構建模型，簡單的復合造模方法與臨床實際病證結合的理念尚存在偏差。

　　中醫(yī)辨證是建立在四診合參基礎上，通過望聞問切識別，而在動物造模過程中無法全面提取四診資料，只能通過簡單觀察或根據儀器進行相關檢測，因此，無法客觀對臨床證型進行復制，證型的確定在一定程度上具有主觀選擇性。同時，在造模過程中干擾因素眾多，容易影響模型的穩(wěn)定性和可靠性;第二是模型評價，OP病證結合動物模型評判尚缺乏統(tǒng)一標準，造模目前主要采用骨密度測量、生物力學指標觀察、血液學指標檢測等手段，缺乏具有中醫(yī)藥自身特色的標準評價體系和觀察指標，因此，國內外對病證結合模型的認可度一直存疑。

　　第三，OP病證結合模型報道相對較少，目前應用較多的僅有三種模型。然而，OP為本虛標實疾病，瘀血致病理論在OP當中同樣具有重要意義，但尚未見到血瘀證或者腎虛血瘀證病證結合模型的報道。在未來研究中，筆者認為OP病證結合模型的構建可以借鑒其他疾病病證結合模型構建的方法，如類風濕性關節(jié)炎等。

　　如今高通量測序及各種組學技術快速發(fā)展，OP病證結合模型的研究可以借助這些先進的技術手段進行系統(tǒng)研究，尋找出中醫(yī)證候與OP之間的生物學關系，從宏觀與微觀、整體與局部相結合的角度，更深入闡明中醫(yī)藥治療OP的作用機制。

　　總之，OP病證結合動物模型尚處于探索階段，距離構建客觀、全面、穩(wěn)定的動物模型仍存在較大差距。因此，必須秉承動物模型研究真實性、穩(wěn)定性、可行性、經濟性等原則，繼續(xù)優(yōu)化模型的構建方法，完善模型的評價體系，加大模型的研發(fā)力度，利用學科交叉進行創(chuàng)新，把握好中醫(yī)藥現代化發(fā)展的歷史機遇，構建出更加貼近臨床實際的國際公認的OP病證結合模型。

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　　醫(yī)學方向論文投稿刊物：中西醫(yī)結合研究報道國內外中西醫(yī)結合研究的新動態(tài)、新進展以及中西醫(yī)結合在臨床、科研、預防、教學等方面的成果，探討中西醫(yī)結合的新思路和新方法。本刊以國內外醫(yī)學院校師生、各級各類醫(yī)院的臨床醫(yī)生，尤其是中醫(yī)、中西醫(yī)結合、針灸和骨傷科學界的醫(yī)務工作者和有關科研人員等為讀者對象。