摘要：目的觀察紫鉚因?qū)��?dòng)脈粥樣硬化小鼠血脂水平的影響。方法6周齡雄性小鼠，采用高脂飲食法建立動(dòng)脈粥樣硬化模型，造模成功后隨機(jī)分為模型組、紫鉚因低劑量組、紫鉚因高劑量組。低劑量組給予紫鉚因0.5g/kg體質(zhì)量，高劑量組給予紫鉚因1.0g/kg體質(zhì)量，對(duì)照組給予等量的生理鹽水。連續(xù)給藥12周后腹主動(dòng)脈取血，分離血清。酶偶聯(lián)比色法測(cè)定血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三醋(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(lowdensitylipoproteincholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(highdensitylipoprotein-cholesterol，HDL-C)水平。結(jié)果與模型組相比，紫鉚因低劑量組和高劑量組均顯著降低血清中TC、TG和LDL~C的含量，但對(duì)HDL~C含量無(wú)影響。結(jié)論紫鉚因可以調(diào)節(jié)血脂水平。

　　關(guān)鍵詞：動(dòng)脈粥樣硬化;小鼠;紫鉚因;血脂水平

　　紫鉚因于1961年由D.G.Roux首次從植物中提純，其化學(xué)名稱(chēng)3，4，2’，4’-四羥基查爾酮，分式:(OH)2C6H3CH:CHCOC6H3(OH)2，紫鉚因具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗炎、抗纖維化等。已有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫鉚因可以抑制黃噪呤化酶的活性鐵誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化作用以及銅催化的人類(lèi)低密度脂蛋白的氧化作用，是比牛育酌更有效的抗氧化劑[1]。在體外實(shí)驗(yàn)中，紫鉚因是抗脂質(zhì)和低密度脂蛋白(LDL)過(guò)氧化的強(qiáng)效抗氧化劑。紫鉚因抑制大鼠腦勻漿中鐵誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化。

　　紫鉚因以濃度依賴(lài)性方式抑制銅催化的人低密度脂蛋白(LDL)的氧化。紫鉚因是一種鐵離子和銅離子的螯合劑。及時(shí)消除機(jī)體內(nèi)過(guò)多的氧化自由基，能夠有效預(yù)防由自由基引發(fā)的一系列疾病，如癌癥、動(dòng)脈硬化、糖尿病、心血管病等，雖然紫鉚因在臨床應(yīng)用過(guò)程中具有良好的治療效果，但是其治療作用的相關(guān)機(jī)制并不清楚，且少有相關(guān)的基礎(chǔ)理論研究報(bào)道。本課題采用動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型，研究紫鉚因?qū)ρ�脂水平的調(diào)節(jié)作用。

　　1材料與方法

　　1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

　　健康SPF級(jí)別6周齡雄性小鼠，長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

　　1.2藥物與試劑

　　紫鉚因由廣東華南藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國(guó)藥準(zhǔn)字Z20040093)。總膽固醇(TC)測(cè)試盒(A111-1)、甘油三酯(TG)測(cè)試盒(A110-1)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL~C)測(cè)試盒(A112-1)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測(cè)試盒(A113-1)購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

　　1.3主要儀器

　　全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(MultiskanSpectrum，美國(guó)ThermoFisher公司)。

　　1.4方法

　　1.4.1選取50只昆明種雄性健康和體重相近的小鼠，將其隨機(jī)均勻分為5組，自由飲水，分組如下：(1)正常對(duì)照組(A組):連續(xù)3天等體積注射生理鹽水并喂養(yǎng)基礎(chǔ)顆粒飼料。(2)AS模型組(B組):喂養(yǎng)造模飼料(基礎(chǔ)顆粒飼料+3%豬油+1%膽固醇)并連續(xù)3天采取腹腔注射維生素D3。(3)紫鉚因低劑量組(C組):喂養(yǎng)造模飼料及連續(xù)3天腹腔注射維生素D3，并添加入低劑量紫鉚因一直持續(xù)12周。(4)紫鉚因高劑量組(D組):喂養(yǎng)造模飼料及連續(xù)3天腹腔注射維生素D3，并添加入高劑量紫鉚因一直持續(xù)12周。以上3組分別于喂飼4周、8周、12周時(shí)測(cè)體重(實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每周均稱(chēng)量，每次稱(chēng)量3次，取平均值，均由同一人操作并記錄)后處死并進(jìn)行解剖取材。

　　1.4.2血樣采集及生化分析：小鼠用10%水合氯醛麻醉后，剪開(kāi)下腹腔，暴露腹主動(dòng)脈，取血0.5~1.0mL。室溫靜置2h。放入離心機(jī)，3000r/min，4°C離心20min，取上清，檢測(cè)TC、TG、HDL-C、LDL~C等生化指標(biāo)。

　　1.5統(tǒng)計(jì)方法

　　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果以(x±s)表示。用單因素方差分析(one~wayanalysisofvariance，ANOVA)進(jìn)行組間樣本均數(shù)比較，P3<0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2結(jié)果

　　2.1紫鉚因?qū)π∈罂偰懝檀己�量的影�?/p>

　　總膽固醇是指血液中所有脂蛋白所含膽固醇的總和，是反應(yīng)血脂水平的重要指標(biāo)之一。結(jié)果顯示，與模型組比較，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組的TC水平顯著降低且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，n=7)。注：與模型組相比，**P<0.01。

　　2.2紫鉚因?qū)π∈蟾视腿�酯含量的影�?/p>

　　甘油三脂是長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人體含量最多的脂類(lèi)，其水平高低與動(dòng)脈粥樣硬化程度密切相關(guān)。根據(jù)血清生化分析結(jié)果顯示，與模型組相比，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組均能顯著降低血漿中的TG的含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P<0.01，n=7)。注：與模型組相比，**P<0.01。

　　2.3紫鉚因?qū)π∈蟮兔芏戎�蛋白膽固醇含量的影�?/p>

　　低密度脂蛋白膽固醇高于正常水平時(shí)，易聚集于大中動(dòng)脈分支及彎曲處，與動(dòng)脈粥樣硬化的生成有直接關(guān)系。與模型組比較，紫鉚因小劑量組LDL~C水平顯著降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(**P<0.01，n=7);紫鉚因大劑量組LDL~C水平顯著降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(磁P<0.001，=7)。注：與模型組相比，**P<0.01。

　　2.4紫鉚因?qū)π∈蟾呙芏戎�蛋白膽固醇含量的影�?/p>

　　高密度脂蛋白膽固醇是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白，可將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝，由膽汁排出體外。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與模型組比較，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組的血清HDL~C水平?jīng)]有明顯差異(P>0.05，n=7)。

　　3討論

　　動(dòng)脈粥樣硬化是腦卒中及外周血管疾病的主要病理基礎(chǔ)，而脂質(zhì)代謝紊亂是動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)重要因素[2]。高血脂癥中大量脂質(zhì)進(jìn)入血管內(nèi)膜下引發(fā)免疫炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，血漿脂蛋白進(jìn)入血管內(nèi)膜，引起巨噬細(xì)胞吞噬反應(yīng)、血管平滑肌細(xì)胞增生，形成斑塊，斑塊堵塞腦血管，則引發(fā)腦卒中[3-4]。紫鉚因(butein)是來(lái)源廣泛的多酚類(lèi)化合物，具有抗腫瘤、抗血管生成、抗氧化等多種生物學(xué)活性。

　　紫鉚因是一種植物來(lái)源的多酚類(lèi)化合物，大量存在于腰果樹(shù)，降香黃檀，漆樹(shù)和箭葉錦雞兒等植物中，但其具體的作用機(jī)理并不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化小鼠血脂水平的檢測(cè)，探討紫鉚因治療腦卒中的相關(guān)機(jī)制。TC是指血液中各脂蛋白所含膽固醇的總和，結(jié)果顯示，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組均可降低TC含量。低密度脂蛋白以膽固醇為內(nèi)核，含4536個(gè)氨基酸殘基的載脂蛋白B100覆蓋于表面，借助非極性的疏水基團(tuán)與內(nèi)核相連。當(dāng)血漿LDL水平高于正常時(shí)會(huì)集聚于大中動(dòng)脈分支彎曲處，進(jìn)入損傷血管內(nèi)膜，氧化生成Ox-LDL。Ox-LDL可對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的完整性造成破壞，促進(jìn)動(dòng)脈內(nèi)膜的脂質(zhì)沉淀，是動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵啟動(dòng)因素。研究結(jié)果顯示，紫鉚因小劑量組和紫鉚因大劑量組可以顯著降低LDL~C的水平。

　　此后，研究人員又進(jìn)一步觀察了紫鉚因?qū)�HDL~C的調(diào)節(jié)作用[5]。HDL~C參與膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，將巨噬細(xì)胞、血管平滑肌等肝外組織細(xì)胞內(nèi)膽固醇攜帶至肝臟轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過(guò)膽汁酸排出體外，從而減輕整體的脂質(zhì)負(fù)荷，所以普遍認(rèn)為HDL~C具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用[6-7]。但HDL~C具有雙重作用，其在生理狀態(tài)下，HDL的抗動(dòng)脈粥樣硬化功能占優(yōu)勢(shì)，處于主導(dǎo)地位[8]。而在病理狀態(tài)下，HDL-C的結(jié)構(gòu)成分會(huì)發(fā)生病理變化，其理化性質(zhì)及功能狀況相應(yīng)改變，使HDL~C抗動(dòng)脈粥樣硬化作用減弱甚至逆轉(zhuǎn)[9]。

　　本研究結(jié)果顯示，與模型組相比，紫鉚因給藥組的HDL<水平?jīng)]有顯著增加或減少，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示紫鉚因用于治療動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中可能和HDL~C水平無(wú)關(guān)。TG是血漿中各脂蛋白所含脂肪的總和，其升高時(shí)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白活性增加，促進(jìn)TG含量在HDL及LDL中表達(dá)增加，HDL和LDL中的TG會(huì)被肝脂酶和脂蛋白脂酶進(jìn)一步水解形成小而致密的HDL和LDL顆粒，LDL顆粒則在血管壁沉積，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。研究結(jié)果顯示，紫鉚因小劑量組和大劑量組均可顯著降低TG的水平。

　　綜上所述，紫鉚因可以顯著降低總膽固醇、低密度脂蛋白及甘油三脂的水平，從而減少動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，提示該途徑可能是紫鉚因治療腦卒中的作用機(jī)制之一。

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　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]司小衛(wèi).依達(dá)拉奉聯(lián)合他汀藥物對(duì)老年動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死神經(jīng)功能及血管內(nèi)皮功能的影響[J].包頭醫(yī)學(xué)，2020，44(01):41-43.

　　[2]SelcukGormez，RefikErdim，GokceAkan，BarısCaynak，CihanDuran，DemetGunay，VolkanSozer，F(xiàn)atmahanAtalar.Relationshipsbetweenvisceral/subcutaneousadiposetissueFABP4expressionandcoronaryatherosclerosisinpatientswithmetabolicsyndrome[J].CardiovascularPathology，2020，46.

　　作者：鄭敏1賀星2向壹瀏3張生輝4吳澤軍5李麗